Phos-tag SDS-PAGE データ集Abltide GST phosphatase assay

Abltide-GST

sRecombinant fusion protein containing peptide EAIYAAPFAKKK with an N-terminal GST-tag, expressed in E. coli. Mr ~28,000

泳動結果

Ablキナーゼの基質タンパク質Abltide-GST をあらかじめリン酸化したものを
チロシンフォスファターゼTC-PTPによって脱リン酸化する過程を観察しています。

0〜60分の反応時間で，脱リン酸化された基質がシフトダウンしています。

Mn²⁺–Phos-tag SDS-PAGE では，各時間での
［リン酸化］/ ［非リン酸化］が定量的にわかることが利点です。

Reference	Kinoshita, E., Kinoshita-Kikuta, E., Takiyama, K., and Koike, T. Phosphate-binding tag, a new tool to visualize phosphorylated proteins. Molecular & Cellular Proteomics, 5, 749-757 (2006) DOI:10.1074/mcp.T500024-MCP200
ゲルの条件	Mn²⁺–Phos-tag:　100µM Polyacrylamide: 10%(w/v)
検出方法	1.　CBB stain

Reference

Kinoshita, E., Kinoshita-Kikuta, E., Takiyama, K., and Koike, T. Phosphate-binding tag, a new tool to visualize phosphorylated proteins. Molecular & Cellular Proteomics, 5, 749-757 (2006)

DOI:10.1074/mcp.T500024-MCP200

ゲルの条件

Mn²⁺–Phos-tag:　100µM

Polyacrylamide: 10%(w/v)

検出方法

1.　CBB stain